CYTO-CAR-YT-Lact

Человек. Модифицированная NK-клеточная лимфома, получена на базе NK-клеточной лимфомы YT путем лентивирусной интеграции кассет кодирующих химерный антигенный рецептор со специфичностью к белку человека PSMA и пептид RL2 (лактаптин). Кроме того, проведено генетическое редактирование, затрагивающее 12 хромосому и проводящее к повышению цитотоксичности клеток.

Происхождение:

Человек. Модифицированная NK-клеточная лимфома, получена на базе NK-клеточной лимфомы YT путем лентивирусной интеграции кассет кодирующих химерный антигенный рецептор со специфичностью к белку человека PSMA и пептид RL2 (лактаптин). Кроме того, проведено генетическое редактирование, затрагивающее 12 хромосому и проводящее к повышению цитотоксичности клеток.

Автор:

Горчаков А.А., Кулемзин С.В., Беловежец Т.Н., Чикаев А.Н., Коваль О.А.; Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН

Морфология:

округлые клетки

Способ культивирования:

суспензионный

Условия культивирования:

среда - IMDM
сыворотка - эмбриональная бычья 10%
др. компоненты - glucose 4.5 g/l, L-glutamine 4mM, HEPES 25 mM, Na-Pyruvate 1mM, PenStrep 1%
процедура пересева - каждые 2 дня суспендирование с пересевом 1:2
криоконсервация -  FBS 90%, DMSO 10%, концентрация клеток 2х10⁶ клеток/мл в ампуле

Жизнеспособность после криоконсервации:

19%

Контроль контаминации:

бактерии, грибы и микоплазма не обнаружены

Контроль видовой идентичности:

кариологический анализ

Кариология:

4n=92, XXYY, пределы изменчивости по числу хромосом 84-98, полиплоиды 12%, модальное число хромосом 92

Эффективность клонирования:

20

Туморогенность:

туморогенны

Другие характеристики:

Суспензионные клетки, при активации способны к умеренному образованию колоний по 3-8 клеток. Форма индивидуальных клеток от сферической, до умеренно неправильной

Участок ДНК интегрировавший в геном содержит сильный конститутивный промотор гена EF1a человека, последовательность, кодирующую сигнальный пептид легкой цепи иммуноглобулина каппа, слитую с последовательностью, кодирующей химерный антигенный рецептор со специфичностью к белку человека PSMA. Далее IRES-элемент кардиовируса А с последовательностью, кодирующей ген устойчивости к антибиотику зеоцин.

Участок ДНК интегрировавший в геном содержит сильный конститутивный промотор гена EF1a человека, последовательность, кодирующую сигнальный пептид люциферазы копеподы Gaussia princeps (GlucSP), слитую с последовательностью, кодирующей пептид RL2 (лактаптин), маркированный гексагистидиновым эпитопом. Далее IRES-элемент кардиовируса А с последовательностью, кодирующей маркер трансдукции или трансфекции, флуоресцентный белок copGFP копеподы Pontellina plumata.

Повышеная цитотоксичности клеток

Область применения:

иммунология, онкология

Коллекции:

Коллекция плюрипотентных культур клеток человека и млекопитающих общебиологического и медичинского назначения ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

Источник получения:

NK-клеточная лимфома, получена на базе NK-клеточной лимфомы YT путем лентивирусной интеграции кассет кодирующих химерный антигенный рецептор со специфичностью к белку человека PSMA и пептид RL2 (лактаптин)

Видовая принадлежность:

Человек (Homo sapiens)